NC轉(zhuǎn)印膜徊都、PVDF轉(zhuǎn)印膜芦拿、正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜的優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比

一催首、什么是Western Blot

就像與SDS提供的電荷結(jié)合一樣扶踊，蛋白質(zhì)可以在電場(chǎng)中從凝膠轉(zhuǎn)移到堅(jiān)固的載體上，即從凝膠中“印跡”到膜郎任。這種方法被稱為蛋白免疫印跡轉(zhuǎn)印秧耗。

蛋白免疫印跡法中蛋白從凝膠轉(zhuǎn)印到膜上

轉(zhuǎn)膜方式主要有兩種：濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)。兩者原理相同舶治，只是用于固定膠/膜疊層及施加電場(chǎng)的儀器有不同分井。半干轉(zhuǎn)耗時(shí)短，但是更適合小分子蛋白的轉(zhuǎn)印霉猛，而濕轉(zhuǎn)蛋白分子量范圍較寬尺锚，在Western Blot實(shí)驗(yàn)中，常用的是濕轉(zhuǎn)惜浅。

二瘫辩、NC轉(zhuǎn)印膜、PVDF轉(zhuǎn)印膜坛悉、正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜的優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比

在蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢測(cè)過程中伐厌，我們都常用的轉(zhuǎn)印膜有三種：正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜/硝酸纖維素NC轉(zhuǎn)印膜/聚偏二氟乙烯膜PVDF轉(zhuǎn)印膜。不同的轉(zhuǎn)印膜規(guī)格和參數(shù)不同裸影。選擇正確挣轨、均一穩(wěn)定的轉(zhuǎn)印膜對(duì)達(dá)到最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果起到關(guān)鍵性作用。

在蛋白免疫印跡法中艰额，可根據(jù)靶蛋白分子大小選擇0.2 µm或0.45 µm孔徑的膜澄港。在大多數(shù)應(yīng)用中，PVDF和硝酸纖維素是等效的柄沮。請(qǐng)注意回梧，PVDF的容量高于硝酸纖維素，但需要更仔細(xì)的預(yù)處理：根據(jù)凝膠大小將膜切割成適當(dāng)大小祖搓，通常比凝膠稍大一點(diǎn)狱意；在甲醇中浸泡約30秒；在ddH2O中清洗約1分鐘拯欧，然后在冰冷的轉(zhuǎn)印緩沖液中孵育5分鐘详囤。凝膠還需要在冰冷的轉(zhuǎn)印緩沖液中平衡3-5分鐘。

三镐作、邁博瑞轉(zhuǎn)印膜推薦

MS®轉(zhuǎn)印膜主要是參與Southern印跡雜交和Northern印跡雜交實(shí)驗(yàn)藏姐，用于實(shí)現(xiàn)基因診斷，通常都是將雜交結(jié)果轉(zhuǎn)移到印記膜上该贾，作為最終判斷依據(jù)羔杨。印跡膜有多種形式：0.2um和0.45um的PVDF轉(zhuǎn)印膜、硝酸纖維素轉(zhuǎn)印膜杨蛋、（Nylon66）尼龍轉(zhuǎn)印膜问畅，這是一種經(jīng)驗(yàn)證的western 雜交介質(zhì)，PVDF用于高載量免疫印跡和蛋白測(cè)序六荒。

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