邁博瑞 s

印跡膜有什么特點

標簽: 轉(zhuǎn)印膜

生物印跡技術(shù)是將待測生物大分子結(jié)合到一定固相支持物(微濾膜)上的方法况凉。主要印跡技術(shù)有Northern印跡、Southern印跡掺栅。生物印跡技術(shù)中的印跡膜是專門用于分離和檢測生物分子(如蛋白質(zhì)想罕、核酸、細胞等)的材料足淆。

目錄

1遇绞、Northern印跡需五、Southern印跡除呵、Western印跡區(qū)別對比

2再菊、印跡膜特性

  • 印跡膜作為印跡技術(shù)中的重要固相支持物的主要特性
  • NC印跡膜、尼龍印跡膜和PVDF印跡膜的區(qū)別

3颜曾、印跡膜性能驗證

4纠拔、邁博瑞印跡膜參數(shù)

 

一、Northern印跡泛豪、Southern印跡稠诲、Western印跡區(qū)別對比

 

Southern blot

Southern blot

Northern blot

Northern blot

Western blot

Western blot

定義

 用于識別特定DNA序列的程序 

Southern blot的改編,通過與互補DNA的雜交來檢測特定RNA序列

用于鑒定蛋白質(zhì)中特定氨基酸 序列的印跡程序

開發(fā)者

1975年诡曙,愛德華

1977年吕粹,詹姆斯.阿爾溫等人

1979年,喬治.斯塔克

檢測到的分子類型

特異性DNA序列

特異性RNA序列

特定蛋白質(zhì)

電泳

瓊脂糖凝膠電泳

甲醛瓊脂糖凝膠電泳

SDS PAGE/聚丙烯酰胺凝膠

印跡程序

毛細管轉(zhuǎn)移

毛細管轉(zhuǎn)移

電動傳輸

探針

DNA探針

cDNA探針

一抗和二抗

樣本制備

變性處理

自然狀態(tài)

自然狀態(tài)

應(yīng)用

檢測給定樣品中特定DNA序列
親子鑒定岗仑、DNA指紋圖譜
受害者識別、識別犯罪
遺傳疾病和傳染因子檢測
基因重排突變和鑒定

識別給定樣品中特定RNA序列
有助于疾病的檢測
基因表達研究

識別給定樣品中的蛋白質(zhì)數(shù)量
檢測血清中病毒或細菌存在
檢測有缺陷的蛋白質(zhì)
用作某些疾病診斷的明確措施

檢測系統(tǒng)

放射自顯影聚请、光檢測和顏色變化

放射自顯影荠雕、光檢測和顏色變化

檢測光線和顏色變化

 

二稳其、印跡膜特性

1、印跡膜作為印跡技術(shù)中的重要固相支持物的主要特性

名稱

特點

NC 印跡膜

無支撐布

不添加洗滌劑

100% 純硝化纖維

高蛋白結(jié)合能力

毛細管率與厚度一致

背淺

PVDF 印跡膜

耐化學(xué)性

無變色

非易燃

高強度

疏水性

背景淺

高蛋白結(jié)合

尼龍印跡膜

親水性

高強度

高化學(xué)耐受性

高蛋白結(jié)合力

 

2炸卑、NC印跡膜既鞠、尼龍印跡膜和PVDF印跡膜的區(qū)別

 

正電尼龍印跡膜

硝酸纖維素印跡膜

PVDF印跡膜

DNA或RNA截留力

480-600ug/cm2

80-100ug/cm2

125-300ug/cm2

蛋白截留力

500ug/cm2

80-100ug/cm2

100-300ug/cm2

結(jié)構(gòu)強度

柔韌、耐化學(xué)試劑盖文,可重復(fù)剝離

膜脆嘱蛋、易破碎,不可重復(fù)使用

強度高五续、耐高溫洒敏、可重復(fù)剝離

吸附力

電荷和疏水作用

疏水作用和電荷

疏水作用和電荷

是否需活化

無需活化

無需活化

需要活化

檢測方法

放射性標記探針
酶抗體偶聯(lián)物(化學(xué)發(fā)光、顯色疙驾、化學(xué)熒光)

放射性標記探針
直接染色凶伙,熒光
酶抗體偶聯(lián)物(化學(xué)發(fā)光、顯色)

直接染色
酶抗體偶聯(lián)物(化學(xué)發(fā)光它碎、顯色)

 

三函荣、印跡膜性能驗證

  • 印跡膜對生物分子的最大吸附能力驗證
  • 印跡膜轉(zhuǎn)印生物分子效果驗證
  • 印跡膜轉(zhuǎn)印燒穿檢測驗證
  • 轉(zhuǎn)印膜背景及靈敏度(最低檢測限度)驗證
  • 轉(zhuǎn)印膜吸附生物分子作用力(疏水和電荷)驗證

 

四、邁博瑞印跡膜參數(shù) 

名稱 濕潤性 靈敏度和分辨率 背景 機械強度 溶劑耐受性 水潤性 蛋白結(jié)合能力 適用染色方法 檢測方式
Nylon66印跡膜 親水性 較高 軟而結(jié)實 較差 緩沖溶液潤濕 >400μg/cm2 不能用陰離子染料 不能用陰離子染料扳肛,受限制
NC轉(zhuǎn)印膜 親水性 干的NC膜易脆 緩沖溶液潤濕傻挂,避免氣泡 80-110μg/cm2 膠體金、麗春紅挖息、酰胺黑金拒、印度墨汁 常規(guī)染色,可用放射性和非放射性檢測
PVDF轉(zhuǎn)印膜 疏水性 機械強度高 100%的甲醇潤濕 125-200μg/cm2 膠體金旋讹、麗春紅殖蚕、酰胺黑、印度墨汁沉迹、考馬斯亮蘭 常規(guī)染色睦疫,較于NC膜可用考馬斯亮藍染色,ECL檢測和快速免疫檢測

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